Méthodes d'analyse en santé animale - Recherche d'anticorps contre la rhinopneumonie équine par la technique de fixation du complément

<H1>1 Domaine d'application 6</H1> <H1>2 Références 6</H1> <H2>2.1 Références normatives 6</H2> <H2>2.2 Références réglementaires 6</H2> <H1>3 Termes, définitions et abréviations 6</H1> <H1>4 Principe et réaction 7</H1> <H2>4.1 Principe 7</H2> <H2>4.2 Réaction 7</H2> <H3>4.2.1 Méthode 7</H3> <H3>4.2.2 Antigènes 7</H3> <H3>4.2.3 Sérums à tester 8</H3> <H3>4.2.4 Sérums de contrôle 8</H3> <H3>4.2.5 Complément 8</H3> <H3>4.2.6 Système hémolytique 8</H3> <H2>4.3 Contrôles 8</H2> <H3>4.3.1 Témoins sérums 8</H3> <H3>4.3.2 Témoins antigènes 8</H3> <H3>4.3.3 Témoin complément 8</H3> <H3>4.3.4 Témoin système hémolytique 9</H3> <H3>4.3.5 Gamme témoin d'hémolyse 9</H3> <H3>4.3.6 Sérums de contrôle 9</H3> <H1>5 Diluants, milieux de culture, réactifs et autres produits 9</H1> <H2>5.1 Diluants 9</H2> <H3>5.1.1 Gélatine glucose barbital (GGB) 9</H3> <H3>5.1.2 Tampon véronal calcium magnésium pH 7,2 (TV) 9</H3> <H2>5.2 Milieux de culture 9</H2> <H2>5.3 Réactifs 10</H2> <H3>5.3.1 Antigènes 10</H3> <H3>5.3.2 Complément de cobaye lyophilisé (C) 10</H3> <H3>5.3.3 Hématies de mouton 10</H3> <H3>5.3.4 Sérum hémolytique de lapin anti-hématies de mouton 10</H3> <H3>5.3.5 Sérums de contrôle 10</H3> <H2>5.4 Autres produits 10</H2> <H3>5.4.1 Eau 10</H3> <H1>6 Appareillage et verrerie 11</H1> <H1>7 Échantillonnage 11</H1> <H1>8 Préparation de l'échantillon pour analyse 11</H1> <H1>9 Mode opératoire 11</H1> <H2>9.1 Épreuve 11</H2> <H3>9.1.1 Préparation des hématies 11</H3> <H3>9.1.2 Préparation du sérum hémolytique 11</H3> <H3>9.1.3 Préparation des antigènes rhinopneumonie et tissu normal 11</H3> <H3>9.1.4 Préparation du complément 12</H3> <H3>9.1.5 Décomplémentation des sérums à tester et des sérums de contrôle 12</H3> <H3>9.1.6 Dilution des sérums à tester et des sérums de contrôle 12</H3> <H3>9.1.7 Répartition des sérums, des antigènes, du tampon et du complément 12</H3> <H3>9.1.8 Réalisation des témoins 12</H3> <H3>9.1.9 Réaction 12</H3> <H3>9.1.10 Étape de révélation 13</H3> <H2>9.2 Validation et lecture 13</H2> <H3>9.2.1 Centrifugation 13</H3> <H3>9.2.2 Validation 13</H3> <H3>9.2.3 Lecture 13</H3> <H2>9.3 Interprétation 13</H2> <H1>10 Conditions de conservation et d'élimination des échantillons 14</H1> <H1>11 Restitution des résultats 14</H1> <H1>12 Fidélité 14</H1> <H1>13 Rapport 14</H1> <H1>Annexe A (normative) Titrage du sérum hémolytique 15</H1> <H1>Annexe B (normative) Constitution d'un stock de complément 16</H1> <H1>Annexe C (normative) Préparation de la gamme d'hémolyse 17</H1> <H2>C.1 Préparation de la gamme d'hémolyse 17</H2> <H2>C.2 Interprétation des résultats 17</H2> <H1>Annexe D (normative) Titrage du complément 18</H1> <H2>D.1 Préparation du complément et de l'antigène, répartition 18</H2> <H2>D.2 Préparation du système hémolytique, répartition 19</H2> <H2>D.3 Lecture et calcul du titre 19</H2> <H3>D.3.1 Lecture du titrage 19</H3> <H3>D.3.2 Calcul de la dilution de complément à utiliser pour les épreuves 19</H3> <H1>Annexe E (normative) Titrage de l'antigène 20</H1> <H2>E.1 Préparation du sérum positif 20</H2> <H2>E.2 Préparation des antigènes 20</H2> <H2>E.3 Répartition des antigènes et du sérum 20</H2> <H2>E.4 Préparation et répartition du complément 20</H2> <H2>E.5 Réalisation des témoins 21</H2> <H2>E.6 Révélation (le lendemain) (9.1.10) 21</H2> <H2>E.7 Validation et lecture 21</H2> <H3>E.7.1 Validation (9.2.1) 21</H3> <H3>E.7.2 Lecture 21</H3> <H2>E.8 Détermination de la dilution d'antigène à utiliser 21</H2> <H1>Bibliographie 22</H1>

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