Le présent document spécifie une méthode de détermination de la teneur totale en vitamine A (rétinol) , vitamine E (a-tocophérol) et vitamine D3 (cholécalciférol) dans les aliments pour animaux à l'aide d'une purification par extraction en phase solide (SPE) et d'une chromatographie liquide à haute performance (CLHP). Le mode opératoire permet également de déterminer la teneur en vitamine D2 mais en utilisant un autre étalon interne. La méthode est intégralement validée pour la vitamine D3 uniquement. La méthode a été soumise à essai avec succès lors d'un essai interlaboratoires effectué sur un aliment complet pour poulets, porcs et dindes, sur un prémélange pour poulets et porcelets, sur un aliment complémentaire pour vaches ainsi que sur un aliment minéral dans les gammes suivantes : vitamine A : 4 365 UI/kg - 4 118 352 UI/kg ; vitamine E : 22 mg/kg - 13 800 mg/kg ; vitamine D3 : 1 668 UI/kg - 1 638 150 UI/kg. Les limites de quantification n'ont pas été déterminées lors de l'étude de validation. Il convient normalement d'atteindre des limites de quantification de 1 100 UI/kg pour la vitamine A (par détection UV) , 4 mg/kg pour la vitamine E (par détection UV) , 2 mg/kg pour la vitamine E (par détection fluorimétrique) et 2 000 UI/kg pour la vitamine D (par détection UV). Des limites inférieures sont envisageables, à condition qu'elles soient validées par l'utilisateur.